El acervo fílmico de la Cineteca Nacional se compone de más de 80 mil rollos en sus diferentes formatos (35mm., 16mm., 9.5mm., 8mm., etc.) que corresponden a un aproximado de 20 mil copias.
Para monitorear el estado de conservación del acervo fílmico, anualmente se revisan físicamente 2,200 copias fílmicas, que son asignadas al personal de revisión técnica para su evaluación física y actualización de ficha clínica, a través del área de control fílmico.
El acervo de películas en soporte acetato y poliéster se organiza en cuatro bóvedas conforme a sus características físicas: largometrajes y cortometrajes, así como color y blanco y negro; mientras que las películas en soporte de nitrato de celulosa se almacenan en la bóveda de nitrato ubicada dentro de las instalaciones de Ciudad Universitaria, a cargo de la Filmoteca UNAM con quien Cineteca Nacional sostiene un convenio para el uso de dicho repositorio. Esta cuenta con ventilación y circulación de aire para desalojar los gases nítricos y nitrosos que emanan de ese tipo de material plástico.
El acervo se constituye por donaciones, por aportaciones que realizan productores y distribuidores que están obligados por la Ley de Cinematografía; y custodias de colecciones de otras instituciones y entidades privadas.